详情描述
【运输与保存】
4℃,保存12个月。
【注意事项】
1. 使用前请将外泌体抽提试剂充分混匀。
2. 产品只针对组织样本,不适用其它体液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提;如果需要进行细胞上清外泌体分离,请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
【操作方法】
一、 样品预处理
新鲜离体组织块(大小 5mg)用无菌的冰 PBS 清洗,洗去血渍及其他组织液。然后放在 加有 5mL无血清的 RPMI 培养基的培养皿上,用眼科剪把组织块剪成芝麻粒大小的小块,放 37℃培养箱培养 12-24h.用吸管小心吸取培养液,4℃800g 离心 10min,收集上清,再 4℃ 20000g 离心去掉细胞碎片,用无菌的 EP 管收集上清液(同一标本可以多做几个平行样,然 后统一收集上清液,以提高 exosome 收集量),4℃或-80℃保存。
二、 外泌体分离纯化
1. 取出组织培养的上清液样本,恢复到室温,并 3000gx20min,4℃离心,取上清,去除大分子蛋白及组织碎片。
2. 0.22um 滤器过滤。
3. 取 1ml 样品转移至一个无菌的新的EP管中,加入exosome分离纯化溶液 0.2mL,用移液枪充分混匀,4℃混匀过夜或>14小时。
4. 1500gX30min,4℃离心。
5. 吸除上清液后,再 1500gX5min,4℃离心,去除残余溶液。
6. 加 50ul 无菌 PBS 或去离子水重悬混匀 exosome 沉淀。
7. 重悬 exosome,4℃可短期保存,-20℃可长期保存。