RNA Extraction Control 670-Quasar 670

特点和优点：

• 简便–方案精简，直接验证 RNA 提取和确定是否存在RTqPCR检测抑制

• 灵敏–即使对 RNA 提取的微小影响以及对扩增的微弱抑制也能通过对照分析识别

• 优化–对照 RNA 具有与任何生物均没有已知同源性的序列，从而避免检测样品 RNA

• 特异–基于探针的检测专门用于 REC 对照序列

• 灵活–适用于广泛的样品类型，包括富含抑制剂的样品，如血液、尿液和唾液样品

仪器兼容性：

RNA 提取对照适用于商用硅膜RNA提取试剂盒，并已在多种实时PCR平台上得到验证测试。

该产品使用了为实现多重实时PCR反应而优化的CAL Fluor或Quasar染料。

产品说明：

qPCR 中的一种常见做法是在 RNA 提取后加入已知量的加标对照 RNA，这可以监测 PCR 抑制，

但作为提取对照没有价值。理想的做法是在 qPCR 之前使测试样品和内部对照接受相同的处理。

Bioline 开发了一种 RNA Extraction Control (REC)，与加标对照相比，它可以更接近地模仿检测样品。

来自检测样品和 REC 的基因材料通过常规提取方法同时提取，提取对照对于抑制和提取失败与检测

样品同样灵敏。

人工 REC 细胞具有已知浓度，含有内部对照 RNA 序列。该序列与任何生物都不具有已知的同源性，

并且重要的是对样品 RNA 检测的干扰最小。在提取 RNA 之前，将 REC 细胞作为标准品加入到具有

目标样品的裂解缓冲液中。然后在扩增之前将对照混合液（包含引物和探针）加入到反应混合物中。

来自内部对照 RNA 的信号可证实提取步骤成功（图1）。REC 还可监测 PCR 抑制剂的共纯化，以免

导致有偏差或错误的扩增模式。

图1 REC监测低效RNA提取

图中显示从a）加标对照DNA 和b）REC 中得到的对照序列的扩增曲线。为了展示低效RNA提取，

在提取RNA是使用PBS替代了裂解缓冲液和/或结合缓冲液。结图中显示了完全裂解缓冲液（黄色）、

无裂解缓冲液（棕色）、无结合缓冲液（灰色）、无裂解且无结合缓冲液（粉色）的结果。 结果表

明，加标对照DNA对RNA提取失败不敏感，而REC很敏感，因为Ct值受到影响。