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组分:DNA聚合酶I (10 U/μl)50 μl;10× DNA Polymerase I 反应缓冲液1.5 ml。
概述:DNA聚合酶I是依赖于DNA的DNA聚合酶,具有3?→5?和5?→3?核酸外切酶活性。该酶的5?→3?外切酶活性能够切除位于延伸链前端的核苷酸,从而使切刻平移成为可能。
来源:重组E. coli菌株,携带有高表达的polA基因。
应用:1. DNA的切刻平移,制备具有高比活性的探针。2. cDNA的第二条链的合成。
贮存条件:25 mM Tris-HCl (pH 7.4 @ 25°C),1 mM DTT,0.1 mM EDTA,50%甘油 (V/V)。
反应条件:1×DNA聚合酶I反应缓冲液,加入dNTPs (不随酶提供),37°C温育。
1×DNA聚合酶I反应缓冲液:10 mM Tris-HCl (pH 7.9 @ 25°C),50 mM NaCl,10 mM MgCl2,1 mM DTT。
单位定义:1单位指37°C条件下,30分钟内能催化10 nmol的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。
活性检测条件:1×DNA聚合酶I反应缓冲液中加入33 μM dNTPs包括[3H]-dTTP和70 μg/ml热变性鲱鱼精DNA。
热失活条件:75°C加热20分钟失活。