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组分:SUMO蛋白酶 (2 U/μl) 100 μl;10× SUMO Protease缓冲液 (Salt Plus)1.0 ml;10× SUMO Protease缓冲液 (Salt free)1.0 ml。
概述:SUMO蛋白酶 (SUMO Protease),也称ULP蛋白酶,是一种高活性的半胱氨酸蛋白酶,它能够高效地把SUMO (Small Ubiquitin-like Modifier) 从融合蛋白上切割下来。不同于大多数蛋白酶 (识别位点为氨基酸序列),SUMO蛋白酶识别SUMO蛋白的三级结构,所以具有极高的特异性。SUMO融合蛋白经SUMO蛋白酶切割后,无末端残留残基,可以获得具有自然氮末端的目标蛋白 (氮末端为脯氨酸的除外)。SUMO蛋白酶的最适反应温度为30°C,可以在较为宽范围的反应体系 (温度4-30°C,pH 5.5-9.5) 中保持活性,并且对部分蛋白变性剂有一定的耐受能力(详见下文)。RobustCutter Sumo蛋白酶具有多聚组氨酸标签 (polyhistidine tag),便于融合蛋白切割后的亲和层析纯化。
来源:重组E. coli菌株,含有酿酒酵母Ulp1基因片段。
酶活性单位定义:在30°C条件下反应1小时,切割100 ?g的反应底物 (SUMO-eGFP) 达90%以上所需的酶量定义为一个活性单位。
溶液成分:
SUMO蛋白酶贮存液:
25 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 25°C);1% IGEPAL? CA-630 (NP-40);250 mM NaCl;50 μM DTT;50% (v/v) 甘油
10× SUMO Protease Buffer (Salt plus):500 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 25°C) ;2% IGEPAL? CA-630 (NP-40);1.5 M NaCl;10 mM DTT
10× SUMO Protease Buffer (Salt free):500 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 25°C);2% IGEPAL? CA-630 (NP-40);10 mM DTT
推荐反应体系:
反应物 体积
SUMO融合蛋白 10 μl (10 μg[#])
RobustCutter Sumo Protease 1 μl (2 U/μl)
10× SUMO Protease Buffer +/- Salt 10 μl
水 79 μl
总体积 100 μl
[#]:1 U RobustCutter Sumo蛋白酶在30°C条件下反应1小时,可以切割大于90 ?g的反应底物 (SUMO-eGFP) ,但对于其它底物的切割效率可能会有差异,初次反应推荐使用2 U的RobustCutter Sumo蛋白酶切割10 μg底物。
各温度下的参考反应时间:4°C反应, 15-16小时;16°C反应, 4小时;25°C反应, 1.5小时; 30°C反应, 1小时。
贮存条件:长期贮存于-80°C,或解冻后保存于-20°C,避免反复冻融,可稳定保持活性半年以上。