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【检验方法】
实验开始前请提前配制好所有试剂:试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应做标准曲线。如样品浓度过高,均应用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 加样:分别设标准孔、待测样品孔。分别加标准品或待测样品50uL。每孔加HRP标记的抗CST1抗体50uL,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,混匀,酶标板上加盖封板膜,37℃反应1小时。
2. 温育后,弃去液体,洗涤五次,拍干。
3. 每孔加底物液100uL,37℃避光显色10分钟。
4. 依序每孔加终止液50uL,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
5. 用酶标仪在450nm、630nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。加终止液后立即进行检测。
注:
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证结果准确。所有试剂都必须在使用前到达室温。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可能导致不准确的结果。在加入底物液前避免样品蒸发,酶标板盖上封板膜,洗板拍干后请立即加入后步试剂,应避免微孔干燥。
3. 在储存和温育时避免强光直接照射。
4. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
【检验结果的解释】
绘制剂量反应曲线:依据CST1标准品含量及其OD值绘制标准曲线。待测样品CST1含量可根据剂量反应曲线查得。