详情描述
【运输与保存】
4℃，保存12个月。
【操作方法】
一、 样品预处理
1. 取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于 25℃水浴中进行解冻，将完全融化后的样品置于冰上；如果是新鲜样品，收集样品后置于冰上。
2. 样品初始用量：（细胞培养上清液20mL）。
3. 离心去细胞碎片：将样品转移至离心管中，于4℃以3000 g离心10 min，去除样品中的细胞碎片。
4. 上清液转移：去除细胞碎片的离心上清液转移到新的离心管中。
二、 提取外泌体
1. 上清液预处理：在去除杂质的离心上清液中加入Exosomoe Concentration Solution（ECS 试剂），具体的加入剂量如下：
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样品名称 |
样品剂量 |
加入ECS剂量 |
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细胞培养上清液 |
20mL |
5mL |
2. 溶液混合：加入 ECS试剂后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀 1 min，再放置于2-8℃静置2 h。
3. 沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于 4℃以10000g离心60min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒。
4. 外泌体重悬：取100μL 1×PBS 均匀吹打离心沉淀物，待其均匀悬浮在PBS中后，将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中。
5. 收获外泌体颗粒：将含有重悬液的 1.5 mL离心管于4℃ 以12000 g离心2 min，保留上清液，该上清液中富含外泌体颗粒。